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人类基因组DNA提取 视讯

来源:哔哩哔哩2023-02-10 10:48:24


(资料图片仅供参考)

一、人类基因组DNA提取实验简介:

人类基因组DNA提取实验中所用细胞裂解液裂解细胞膜,收集细胞核,添加SDS破坏核膜,使用蛋白酶K将核蛋白降解为小片段,然后从DNA上解离,通过苯酚-氯仿提取去除蛋白质,然后用无水乙醇,75。用%乙醇洗涤DNA沉淀物,真空干燥,并溶解在TE中以获得高分子量DNA。

二、人类基因组DNA提取实验所需试剂:

1.5ml Ep离心管,蛋白酶K溶液,NaAc,1000ul蓝吸头

三,人类基因组DNA提取实验步骤:1.细胞分裂和RNase /蛋白酶K消化①将100微升抗凝全血放入1.5ml Ep离心管中,然后加入100微升裂解物和20微升RNaseA /蛋白酶K溶液,来回吸打混合,并在55°C孵育35min将离心管倒置来回几次直到溶液是水溶性的。②加入10微升的3M NaAc(pH 4.8),然后加入1250微升的结合缓冲液,充分摇匀以在12,000 rpm下离心30秒。2. DNA与吸附柱结合用移液管转移上清液,并将其加入离心吸附柱(设置收集管)中,静置1min以离心12,000 rpm30秒,然后将废液丢弃在收集管中。注意:待转移的上清液约为1300微升,而离心吸附柱的容量约为650微升,因此每次需要将650微升的上清液转移至离心吸附柱,进行离心处理,将废液丢弃在收集管中,然后重复实验操作步骤3。3. DNA的纯化①在离心吸附柱(设置收集管)中加入600微升洗涤缓冲液(洗涤缓冲液),以离心12,000 rpm30秒。②重复步骤4一次,以离心12,000 rpm3分钟以完全除去洗涤缓冲液。③小心取出离心吸附柱,弃去收集管,将离心吸附柱放入干净的1.5ml Ep离心管中,向离心吸附柱添加50微升分离缓冲液(洗脱缓冲液)(代替缓冲液,必须添加在离心吸附柱的中央)静置1min,以离心12,000 rpm30秒。④取出装有提取的基因组DNA的Eppendorf离心管。4. DNA的琼脂糖凝胶电泳取8-10微升基因组DNA,加入2微升上样缓冲液,充分混合,将样品加入1%琼脂糖凝胶斑点中,然后进行电泳。

标签: 高分子量 真空干燥 琼脂糖凝胶

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